 |
 |
 |
 |
 |
 |
 |
 |
|
| Качестве реагента предложили Определения тренболона ацетатов Надосадочной жидкости Аналитической химии Серной кислотой |
Оксистероид дегидрогеназу осдгФотометрический вариант метода (15, 31, 48, 58, 79, 93, 163, 189, 196) характеризуется средней чувствительностью (молярный коэффициент поглощения НАДН при 340 нм равен 6300 (24)). Поскольку НАДН флуориметрически активен (длина волны возбуждения 345 нм, испускания 450 нм), чувствительность гораздо возрастает при использовании флуоримет-рического варианта метода (15, 20, 61, 80, 116, 132, 144, 168, 195).Из ферментов пользуют За-оксистероид—дегидрогеназу (За-ОСДГ) и 7а-оксистероид—дегидрогеназу (7а-ОСДГ). При использовании недостаточно чистых ферментов селективность методики снижается. К примеру, Энгарт и Тёрнер (58) отмечали воздействие спиртов (воспитание НАДН), являющихся растворителями желчных кислот. Эти помехи можно просто устранить при удалении спирта из реакционной смеси. Доступные в реальное время высокочистые ферменты способствуют решению трудности селективности. Определению желчных кислот в образцах сыворотки имеют все шансы препятствовать ферменты, содержащиеся в сыворотке, в следствии этого перед добавлением реагента их инактивируют, к примеру нагреванием при рН 9 и 67°С на протяжении 20—30 мин (124, 142). Что касается селективности внутри класса желчных кислот, то очень важно заявить, что За-ОСДГ-НАД окисляет все главные желчные кислоты, и в следствии этого его можно применять для определения общей концентрации желчных кислот. Чувствительность реакции сравнительно глициновых и тауриновых конъюгатов та же (58). В случае если мишень анализа состоит в получении данных о концентрациях персональных желчных кислот и их конъюгатов, то их следует предварительно разделить способом ТСХ или же электрофореза на ацетатцеллюлозном геле (20, 80, 116). Элюаты, полученные вымыванием зон хроматограмм, исследуют с помощью ферментативного метода. Конъюгаты пары дезоксихолевая кислота — хенодезоксихолевая кислота с помощью ТСХ разделить тяжело. Для устранения этих трудностей Макдональд и др. (114, 116) поступали следующим образом: определяли флуориметрическим способом суммарное содержание конъюгатов дезокси- и хенодезоксихолевой кислот, как описано выше, а с помощью 7а-ОСДГ (см. схему (6.2) ) селективно определяли конъюгаты хенодезоксихолевой кислоты. Современный вариант этого метода (116а) включает 3 стадии с применением За-ОСДГ, 7а-ОСДГ и 12а-ОСДГ. При ферментативном определении З-кетопроизводных желчных кислот обыкновенно их предварительно восстанавливают боро-гидридом натрия (14—16); описано тоже и ферментативное восстановление кетогруппы со спектрофотометрическим контролем расхода НАДН (3). |
| Гфб эстрадиол тмс Крови рыбий жир | |