 |
 |
 |
 |
 |
 |
 |
 |
|
| Способом конкурирующего связывания Способов определения холестерина Флуоримет рического обнаружения Протекания реакции Фармацевтическом анализе стероидов Высокоэффективная жидкостная |
Определения желчных кислотСледует заметить, что равновесие реакции (схема (6.2)) смещается вправо, в случае если связывать образующиеся кетопроизвод-ные в форме производных гидразина. Чтобы достичь желаемого результата обыкновенно используют гидразингидрат (20, 31, 48, 58, 61, 93, 163, 189), но описано тоже применение семикарбазида (163) и реактива Т Жирара (163). Реакции обыкновенно проводят в слабощелочной среде при инкубировании на протяжении 30—40 мин. Для введения поправки на фоновое поглощение или же флуоресценцию используют подобающий реагент и проводят неженатый опыт.
>Ж-(СН2)2-$ОзНВ более современном варианте ферментативного определения желчных кислот дальнейшее увеличение селективности достигается за счет проведения дополнительной ферментативной реакции. Осуга и др (142), Скред и др. (174), Бруусгаард и др. (30) и Гилус-Мо и Гогстад (68) пользовались способ, предложенный Машиге и др. (124), для серийного определения желчных кислот сыворотки. В этом методе НАДН, образующийся в первичной реакции, взаимодействует с резазурином в пребывании диафоразы с образованием флуориметрически активного продукта — резоруфина (длина волны возбуждения 565 нм, испускания 580 нм). 
Сообразно методике (142), 0,1 мл сыворотки смешивали с 2,5 мл буферного раствора (рН 9) и нагревали для инактивации ферментов при 67°С на протяжении 20 мин. После чего прибавляли 0,4 мл реагента, содержащего 0,1 мл За-ОСДГ (0,0048 МЕ), 0,1 мл 0,5 мкМ НАД, 0,1 мл диафоразы (0,25 МЕ) и 0,1 мл 200 мкМ резазурина. Смесь инкубировали 40 мин при 20°С. Для введения важных поправок проводили неженатый опыт, используя воду вместо сыворотки или же то же самое количество сыворотки, но в отсутствие За-ОСДГ. Линейный градуировоч-ный график можно построить для интервала концентрации желчной кислоты от 0 до 80 мкмоль/л. Увеличение селективности метода разрешает опустить стадию экстракции при определении желчных кислот в сыворотках и делает его пригодным даже для анализа окрашенных фекальных экстрактов (18).Обзор работ по применению ферментов для определения Желчных кислот не будет абсолютным, в случае если хотя бы кратко не упомянуть о ферментативном гидролизе конъюгатов желчных кислот. В разд. 6.2.5 уже упоминалось, что гидролиз необходим, к примеру, при выполнении газохроматографического анализа. Применение холоилглицин-гидролазы разрешает провести гидролиз в очень податливых условиях (рН 5,6, комнатная температура, не очень большая продолжительность реакции), что является заметным преимуществом перед обычным щелочным гидролизом (154), требующим больше жестких условий. |
| Вращения плоскости Возникает пребывании стероидов | |